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表达/抑制miRNA AdV

MicroRNA(miRNA)是一类内生的、不超过22nt的非编码单链RNA分子,它能够同靶基因3‘UTR通过互补配对相互作用,从而关闭或抑制其表达。miRNA是转录后调控的重要机制,参与精细调节体内超过60%基因的表达。维洛信使用应用最广的5型腺病毒,现提供介导miRNA表达/抑制的重组腺病毒制备服务。我们采用新一代AdMax双质粒共转染系统,重组效率高,避免了细菌重组的不确定性,生产的高滴度、高纯度的病毒颗粒可直接应用于各类体内体外的miRNA相关研究。

用于表达-抑制microRNA的腺病毒(AdV)制备服务

Fig 1. Strategies in miRNA-based therapy. (Merhautova J, Demlova R, Slaby O. 2016)


重组腺病毒载体优势:

1. 宿主范围广:能够感染分裂期细胞与静止期细胞;对上皮细胞有高度嗜性,尤其适用于感染原代细胞、悬浮细胞等难转染细胞类型
2. 感染效率高:优于其他病毒载体和转染系统的高感染能力,能达到近100%的效率
3. 包装容量大:最高可插入7.5 kb的外源片段
4. 表达水平高:1-2d即开始高水平表达
5. 安全系数高:去除病毒蛋白编码序列,降低细胞毒性和免疫反应;双质粒转染系统,生物安全性高
6. 无整合风险:无插入致突变性

服务流程:

1. 方案沟通
2. 基因克隆:根据目标miR,将其pri-miR及上下游构建入腺病毒转移质粒(miR表达)/设计miR封闭序列,并构建入腺病毒转移质粒(miR抑制);测序验证
3. 病毒包装:AdMax双质粒共转染(转移质粒+病毒包装质粒)入293宿主细胞, 借助Cre/loxP系统生成重组腺病毒颗粒
4. 收毒:短暂孵育后收获病毒液
5. 扩增与纯化:根据客户要求进行病毒扩增;超速离心纯化,超滤浓缩
6. 质量控制:
- 多重酶切质粒鉴定
- qPCR检测病毒滴度
- 病毒颗粒光密度(OD260)

包装服务流程图


交付内容:

定制腺病毒病毒颗粒
对照病毒(可用于转导测试)
详细实验报告

维洛信腺病毒平台:

1. 先进AdMax包装系统与严格制备工艺,力求获取最优滴度、活性、纯度与一致性的腺病毒产品
2. 20余种组织特异性启动子(CMV, Ubc, U6等)与多种报告基因(EGFP、mCherry、EYFP等)可供选择,满足您的不同需求
4. 滴度高:维洛信可提供1010~1011 pfu/mL及以上滴度的病毒,满足大部分实验的使用要求
5. 灵活生产:我们提供体外应用级别与体内应用级别各种规格的病毒(小规格、中规格、大规格)的制备服务
6. 具有竞争力的价格与货期

针对不同应用方向,我们提供以下腺病毒制备服务:

了解更多腺病毒(AdV)服务,请拨打137-1756-5893咨询我们。

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