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Lenti-CAR慢病毒包装

嵌合抗原受体T细胞免疫疗法(Chimeric Antigen Receptor T cell Immunotherapy, CAR-T)是一项新兴的细胞免疫疗法技能,在肿瘤治疗领域拥有广阔的应用前景。其一般流程包括:抗原筛选和scFv制备、CAR病毒载体构建、T细胞转染、靶细胞表面抗原验证、CAR-T细胞体内体外杀伤力和增殖力验证等。基于成熟的病毒包装技术平台,维洛信现提供CAR慢病毒(Lenti-CAR)包装服务,获得的病毒颗粒可以直接用于CAR-T细胞制备。

CAR-T慢病毒包装服务


Fig 1. CAR-T细胞疗法流程示意图


CAR-T慢病毒包装服务


Fig 2. CAR-T细胞制备流程. (R Munisvaradass, SDS Lee, et al. 2017)


慢病毒优势:

1. 广泛宿主细胞:能够感染分裂期与静止期细胞;包膜质粒使用疱疹病毒VSVG蛋白,宿主范围更广,包括神经元细胞、肿瘤细胞、心肌细胞、干细胞等多种类型的细胞。
2. 极强感染能力:慢病毒载体具有极高的感染效率,尤其适用于难转染的神经元细胞、干细胞、原代细胞和其他不分化细胞。
3. 长期稳定表达:外源基因整合入基因组,实现持久性表达。
4. 低免疫原性:体内实验不易造成非特异性反应与免疫抑制。
5. 高安全系数:尚未发现对人的致病性,已被应用于临床CAR-T治疗;采用三质粒包装系统,去除致病基因和辅助序列,包装质粒和载体质粒尽量降低同源性,进一步提高了生物安全性。

服务流程:

1. 方案沟通
2. 基因克隆:将指定scFv基因(Gene of interest)构建入CAR框架质粒,测序验证
3. 病毒包装:三代慢病毒包装系统共转染入293细胞
4. 收毒:48 h、72 h孵育后收获培养上清
5. 纯化浓缩:超速离心+超滤, 去除杂质蛋白和DNA;根据不同要求,我们还可应用切向流过滤、离子交换层析、蔗糖梯度离心等方式进一步纯化与浓缩
6. 质量控制:
- 多重酶切质粒鉴定
- 流式细胞仪检测GFP阳性细胞比率(感染效率检测)
- qPCR检测病毒滴度

交付内容:

定制Lenti-CAR颗粒
对照病毒(可用于转导测试)
详细实验报告

维洛信Lenti-CAR包装平台:

1. 成熟慢病毒包装平台与经验丰富的技术团队,力求获取最优滴度、活性、纯度与一致性的慢病毒产品
2. 提供二代CAR框(CD28, ICOS, OX40等)、三代CAR框(CD28, ICOS, 4-1BB, OX40等联合)、定制CAR框等可供选择
3. 滴度高:维洛信可提供107~108 TU/ml及以上滴度的病毒,满足后续转染需求
4. 灵活生产:我们提供科研与临床应用级别各种规格的病毒(小规格、中规格、大规格)的制备服务
5. 具有竞争力的价格与货期

针对不同应用方向,我们还提供以下病毒制备服务:


了解更多慢病毒服务,请拨打137-1756-5893咨询我们。

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