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表达/抑制miRNA慢病毒制备

MicroRNA(miRNA)是一种内生的、短小的非编码单链RNA,它能够同靶点基因的3’UTR互补配对,并导致基因沉默或抑制表达。miRNA网络是转录后表达调控的重要机制之一,参与精细调节体内超过60%的基因。miRNA在进化中高度保守,在很多生物活动中扮演重要角色,miRNA的异常与很多疾病发病密切相关。基于先进的慢病毒技术平台,维洛信现提供介导microRNA表达/抑制的慢病毒制备服务。我们采用第三代包装系统系统在293T细胞中进行慢病毒的生产与包装,并建立了完善的纯化和质控方法,生产的慢病毒颗粒可直接应用于各类体内体外试验。

用于表达-抑制microRNA的慢病毒制备服务

Fig 1. microRNA合成机制示意图 (Rogobete AF, Sandesc D, et al. 2018)

慢病毒优势:

1. 广泛宿主细胞:与逆转录载体不同,能够感染分裂期与静止期细胞;包膜质粒使用疱疹病毒VSVG蛋白,宿主范围更广,包括神经元细胞、肿瘤细胞、心肌细胞、干细胞等多种类型的细胞。
2. 极强感染能力:慢病毒载体具有极高的感染效率,尤其适用于难转染的神经元细胞、干细胞、原代细胞和其他不分化细胞。
3. 长期稳定表达:外源基因整合入基因组,实现持久性表达,可应用于构建稳定细胞系、制备转基因动物等。
4. 低免疫原性:体内实验不易造成非特异性反应与免疫抑制。
5. 高安全系数:尚未发现对人的致病性,已被应用于临床治疗;采用三质粒包装系统,去除致病基因和辅助序列,包装质粒和载体质粒尽量降低同源性,进一步提高了生物安全性。

服务流程:

1. 方案沟通
2. 基因克隆:根据目标miR,将其pri-miR及上下游构建入慢病毒转移质粒(miR表达)/设计miR封闭序列,并构建入慢病毒转移质粒(miR抑制);测序验证
3. 病毒包装:三代慢病毒包装系统(转移质粒 + 包装质粒 + 包膜质粒)共转染入293T细胞
4. 收毒:48 h、72 h孵育后收获培养上清
5. 纯化浓缩:超速离心+超滤, 去除杂质蛋白和DNA;根据不同要求,我们还可应用切向流过滤、离子交换层析、蔗糖梯度离心等方式进一步纯化与浓缩
6. 质量控制:
- 多重酶切质粒鉴定
- p24 ELISA核心蛋白定量
- 细胞转导检测(带有荧光标签)
- qPCR检测病毒滴度

包装服务流程图

交付内容:

定制慢病毒颗粒
对照病毒(可用于转导测试)
详细实验报告

维洛信慢病毒平台:

1. 三代慢病毒包装系统与严格制备工艺,力求获取最优滴度、活性、纯度与一致性的慢病毒产品
2. 多种优化启动子(CMV, mCMV, CAG, PGK, Ubc等)与报告基因(EGFP、mCherry、EYFP等)可供选择,满足您的不同需求
3. 滴度高:维洛信可提供108~109 TU/ml及以上滴度的病毒,满足大部分实验的使用要求
4. 灵活生产:我们提供体外应用级别与体内应用级别各种规格的病毒(小规格、中规格、大规格)的制备服务
5. 具有竞争力的价格与货期

针对不同应用方向,我们提供以下慢病毒制备服务:

了解更多慢病毒服务,请拨打137-1756-5893咨询我们。

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